晨怡热管  哈尔滨晨怡热管技术有限公司  晨怡热管技术研究所

晨怡热管 http://nx8.net/news/57/ 2006-10-2 1:44:05

日期:2006-1-20 15:37:42 来源:来自网络 查看:[大 中 小] 作者：不详 热度：

一、准备工作（一）

（一）洗涤实验所需器皿：（玻璃器皿的清洗）

 

1、  用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷

 

2、  将器皿在自来水下冲洗干净

 

3、  将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干

 

注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时，再经自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗1~3次 烘干备用。

 

（二）配制： 硫酸洗液的配制

 

清洁液（洗液）的配制：

 

    成分          强酸液  次强酸液  弱酸液

 

    浓硫酸（ml）    1000      200      100

 

  重铬酸钾（mg）    63      120      100

 

    蒸馏水 （ml）    200      200      1000

 

 

 

 

 

重铬酸钾    1200g

 

蒸馏水      2000ml

 

将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中，边倒边用木棒轻轻搅拌

 

（三）载玻片与盖玻片的处理

 

1.        将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时

 

2.        流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍

 

3.        95%~100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用

 

注：在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时，要一片片地投入，使其不致重叠。

二、准备工作（二）常用液体的配制

 

（一）缓冲溶液：

 

1．磷酸盐缓冲液

 

A液：0.1mol/L磷酸二氢钠

 

B液：0.1mol/L磷酸氢二钠

 

A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（3：7≈PH7.0）

 

2．枸椽酸缓冲溶液

 

A液：0.1mol/L枸椽酸

 

B液：0.1mol/L枸椽酸钠

 

A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（6.2：42.8≈PH6.2）

 

（二）固定剂：

 

1．甲醛：10%甲醛

福尔马林    100ml
 

蒸馏水      900ml

 

注：实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。

 

2．10％中性福尔马林钙固定液

 

甲醛液    10ml

 

蒸馏水   90ml

 

加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。

 

3．4%多聚甲醛：

 

8%多聚甲醛

多聚甲醛  8g

 

蒸馏水    100ml

 

加温至60℃左右，不时搅拌，成为乳白色溶液。滴加1N NaOH，并不停搅动至液体清明。

 

1N NaOH

 

lN等于1L溶液中某种物质1mol除以该物质的氢当量价所得数值的量

 

氧化钠(NaOH )；分子量＝40．005，当量价＝1

 

1N Na0H的配制方法为：m＝40．005／1＝40．005g。取40．005gNaOH溶解于1L蒸馏水中

4%多聚甲醛

 

8%多聚甲醛        50ml

 

0.1M磷酸盐缓冲液  50ml

 

PH7.2

 

先取50 ml 8%多聚甲醛，用0.1M磷酸二氢钠和0.1M磷酸氢二钠将PH值调至7.2

4．Bouin液：

 

苦味酸饱和水溶液      75ml

 

36％~40％福尔马林液    25ml

 

冰醋酸                5m1

 

5．改良Bouin氏固定液

苦味酸饱和水溶液      45ml

 

95%酒精              45ml

 

36％~40％福尔马林液    5ml

 

冰醋酸                5m1

6．Carnoy液：

 

冰醋酸    10 m1

 

氯仿      30 m1

 

无水乙醇  60 m1

 

以上三者临用前混合，预冷至4℃后使用。24小时后固定液失效。

 

（三）染色液

 

1．Harris苏木精液

 

A液：

 

苏木精          1g

 

无水酒精        10ml

 

B液：

 

铵矾或钾矾      20g

 

蒸馏水          200ml

 

氧化汞          0.5ml

 

冰醋酸          8ml

 

将矾溶于水，加热溶解（B液），稍冷后将苏木精酒精液（A液）混入B液，加热，稍冷却，加氧化汞，再继续加热1分钟，染液变为紫色，注意在加氧化汞时宜逐渐少量加入，防止染液溅出。全冷后呈深紫色，将烧杯口用纱布盖好，隔夜过滤，在过滤液内每96 ml中加4 ml冰醋酸，放置1周后成熟，即可用于染色，保存期1~2个月。此染液在加醋酸后，对核染色特具选择性，故很适于脱落细胞的核染色。由于染液内已加有氧化剂，故不能长期储存，但利于配后即用。

 

2．Mayer苏木精掖

 

苏木精        1g

 

钾矾或铵矾    50g

 

碘酸钠        0.2g

 

蒸馏水        1000ml

 

水合氯醛      50g

 

枸橼酸        1g

 

将苏木精，钾矾及碘酸钠依次加入水内，略加热并搅拌，此时液体呈蓝色，待全溶后过夜。再加入水合氯醛及枸橼酸并加热至煮沸5分钟，冷后过滤备用。如不急用可不煮沸而在室温待其成熟，染液可较长期贮存使用。核染色鲜明，染色时间5—10分钟。用该染液染色后，不需分化，充分水洗蓝化后即可，伊红复染细胞质，使用一段时间后就要换新溶液。

 

3．Hasnsen甲矾苏木精的配制

 

A液：苏木精      1g

 

      无水乙醇    10ml

 

B液：钾矾        20g

 

      蒸馏水      200ml

 

C液：高锰酸钾    1g

 

      蒸馏水      16ml

 

三液分别溶化后，将A液倒入B液，再加入C液3ml，充分搅拌均匀后加热至沸腾，1分钟左右，将容器置于冷水中使其迅速冷却，此液配后即可使用，染后无需碱化，细胞核即为蓝色，效果较好，高锰酸钾可以迅速氧化苏木精（每1g苏木精需0.177g高锰酸钾氧化）。

 

4．伊红

 

0.5~1%水溶液或酒精溶液。

 

1．水溶性伊红

 

伊红    5~10g

 

蒸馏水  1000ml

 

冰醋酸  10滴

 

先将水溶性伊红加入蒸馏水中，用玻璃棒搅起泡沫后过滤，再加冰醋酸。

 

2．醇溶性伊红

 

伊红            5~10g

 

70%~90%酒精  1000ml

 

冰醋酸  10滴

 

（四）其它

 

1．麻醉剂：

 

2~4%戊巴比妥钠，1ml/kg体重（45mg/kg）。

 

2．各级浓度酒精的配制

 

75%；85%；95%；100%酒精。75%和85%酒精用95%酒精配制；（取75ml95%酒精，加水至95ml，即为75%酒精）

 

3．盐酸洒精

 

多用于多种染色过程中的分色，如苏木精染色后分色。配法是在100ml的70％酒精内加0.5~1ml的浓盐酸(Hcl)。用盐酸酒精分色后要经自来水充分冲洗组织切片，去除所含的酸再作其他处理。

 

4．碘酒

 

取碘5g，溶于95％酒精80ml，再加入20ml蒸溜水即成

 

5．生理盐水

 

以氯化纳0.85~0.90g溶于100m1蒸馏水配成的生理盐水适用哺乳动物

 

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